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免疫熒光染色實驗服務(wù)
免疫熒光染色實驗服務(wù)
更新時間:2023-10-09
型    號:
所屬分類:病理學(xué)檢測實驗
報    價:80
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服務(wù)名稱:免疫熒光染色實驗服務(wù)
規(guī)格:切片
價格:80
收費標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。
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免疫熒光染色實驗服務(wù)產(chǎn)品概述:


免疫熒光染色實驗服務(wù)

、制片

選無自發(fā)性熒光的石英玻片或普通優(yōu)質(zhì)玻片,洗凈后浸泡于無水乙醇和乙氧基乙烷等量混合液中。用時取出用綢布擦凈。將待檢樣品如組織塊剪成適當(dāng)大小印壓于玻片上。也可采用冰凍切片或石蠟切片樣品。


二、固定

除研究細胞表面抗原或不穩(wěn)定抗原可不固定外,--般均應(yīng)固定。

固定的作用有三:

1.防止標(biāo)本從玻片上脫落。

2.除去防礙抗原抗體結(jié)合的類脂,使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果。

3.固定的標(biāo)本易于保存,如組織切片固定后在-20%C下可保存一年而不改變其染色特性。

標(biāo)本的固定原則是:

1.不能損傷細胞內(nèi)的抗原。

2.不能凝集蛋白質(zhì)。

3.不能損傷細胞形態(tài)。

4.固定后應(yīng)保持細胞膜的通透性,以允許抗體進入與抗原結(jié)合。


三、水洗

固定后以冷的0.01 Mol/L pH7 4PBS液浸泡沖洗,后以蒸餾水沖洗,防止自發(fā)性熒光。


四、染色

染色分直接染色法與間接染色法。

1.材料與試劑

(1)熒光抗體,稀釋至應(yīng)用濃度。

(2) 0.01 Mol/L pH7 .4PBS液

(3) 9份優(yōu)質(zhì)甘油加1份pH7 .4PBS液即為甘油緩沖液。甘油有減少非特異性熒光的作用。

(4)帶蓋方盤。

2. 直接染色法

(1)將固定好的玻片置于濕盤中,滴加熒光抗體染色液,以覆蓋為度,加蓋,37°C感做30min~45min.

(2) PBS沖洗3次,每次沖洗3 min,即3x3沖洗。

(3)蒸餾水沖洗。

(4)滴甘油緩沖液一滴,封片,熒光顯微鏡檢查。


3.間接染色法

(1) 檢查抗原:

①取固定標(biāo)本,加已知的免疫血清,37°C孵育30 min。

②以PBS液3x3沖洗。

③再加熒光標(biāo)記的抗抗體,37°C孵育30 min。

④PBS 3x3沖洗。

⑤H2O沖洗,涼干。

⑥加甘油緩沖液,封片、鏡檢。

(2)檢查抗體:

①兔疫后動物的淋巴組織涂片,自然干燥,甲醇固定。

②滴加相應(yīng)抗原液(按1: 100~1: 500稀釋), 37°C孵育30 min.

③PBS液3x3沖洗。

④加熒光抗體,37°C孵育30 min.

⑤PBS液3x3沖洗。

⑥水洗,干。

⑦加甘油緩沖液,封片、鏡檢。


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