| 更新時間： | 2019-08-27 |
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| 所屬分類： | （牛奶﹑羊奶﹑奶粉）檢測 |
| 報 價： |  |
公司的獸藥殘留快速檢測試劑盒（例：克倫特羅檢測試劑盒、氯霉素檢測試劑盒、硝基呋喃類檢測試劑盒）、動物疾病診斷試劑（例：豬弓形蟲抗體檢測試劑盒、豬藍耳病檢測試劑盒、豬瘟病毒檢測試劑盒）、分子生物學(xué)工具酶、綠色水產(chǎn)藥品等一系列的產(chǎn)品已在國家機關(guān)、企業(yè)、科研單位廣為應(yīng)用。磺胺多殘留快速檢測試劑盒說明書
磺胺多殘留快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物磺胺類藥物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗磺胺類藥物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物磺胺類藥物的含量成負相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物磺胺類藥物的含量。
二、試劑盒特性
- 試劑盒靈敏度： 0.4ppb
u 孵育溫度： 25℃
u 孵育時間： 30min～15min
- 樣本檢測下限
組 織（高 檢 測 限 方 法） 0.4 ppb
蜂 蜜 0.4 ppb
血 清 、尿 液 1.6 ppb
牛 | 奶 ········································· | 8 ppb |
u | 交叉反應(yīng)率 |
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磺胺甲基嘧啶（SM1 ） ························· | 100% | |
磺胺嘧啶（SD 或 SDZ）························· | 130.2% | |
磺胺間（六）甲氧嘧啶（SMM） 181.8%
磺胺甲噁唑（SMZ） 86.6%
磺胺異噁唑（SIZ） 76.5%
磺胺噻唑（ST） 103.3%
磺胺喹噁林(SQX) | 59.4% |
磺胺甲氧噠嗪(SMP) | 68.6% |
磺胺氯吡嗪(Esb3) | 72.1% |
磺胺氯噠嗪(SCPA) | 49.6% |
磺胺對甲氧嘧啶（SMD） 194.8% | |
磺胺二甲基嘧啶（SM2） | 79.3% |
磺胺二甲異嘧啶（SM2′） | 100.6% |
磺胺間二甲氧嘧啶（SDM） | 140.8% |
磺胺鄰二甲氧嘧啶（SDM′） 132.1%
磺胺多辛（SDM2） 144.7%
酞?；青邕颍?/span>PST） 73.9%
磺胺苯酰（SML） 104%
磺胺咪(SG) 0.1%
由反應(yīng)交叉率可以得出：該試劑盒可用于磺胺多種殘留物的檢測，*國家磺胺類多殘留種類檢測的要求。
- 樣本回收率
組 | 織 、尿 樣、牛 奶 | 85% ±25% | |||
蜂 蜜、血 清 | 80% ±23% | ||||
三、試劑盒組成 |
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| 1 |
| 微量測試孔 | 每條 8 孔，一板 12 條 | |
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| 標(biāo)準(zhǔn)液×6 瓶 | 0ppb | 0.4ppb |
| 2 |
| 0.8ppb | 1.6ppb | |
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| （1ml/瓶） | |||
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| 3.2ppb | 6.4ppb | |
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| 3 |
| 酶標(biāo)記物 | 7ml | 紅色帽 |
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| 4 |
| 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
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| 5 |
| 底物 A 液 | 7ml | 白色帽 |
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| 6 |
| 底物 B 液 | 7ml | 黑色帽 |
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| 7 |
| 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
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| 8 |
| 20X 濃縮復(fù)溶液 | 50ml | 透明帽 |
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| 9 |
| 20X 濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
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四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量 0.01g）、氮吹儀、刻度移液管
微量移液器：單道 20µl～200µl、單道 100µl～1000µl、多道 30～300 µl
試 劑：乙酸乙酯、Na2HPO4·12H2O、乙qing、
NaH2PO4·2H2O、K2HPO4·3H2O、二氯甲wan、正己烷
五、樣本前處理步驟
- 樣本處理前須知
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
u 樣本前處理需配制：
配液 1 0.1M K2HPO4 溶液稱取 11.4g K2HPO4·3H2O 用去離子水500ml 溶解。配液 2 0.02M PB 緩沖液稱取 5.16g Na2HPO4·12H2O 和 0.87gNaH2PO4·2H2O 加去離子水 1L 溶解。
配液 3 乙qing-二氯甲*烷混合液
V 乙qing-V 二氯甲*烷 = 1 : 4
配液 4 樣本復(fù)溶液：
將 20X 濃縮復(fù)溶液用去離子水 1：19 稀釋。
- 樣本處理：
（a）組織高檢測限處理方法一
1、稱 2.0±0.05g 均質(zhì)過的組織樣本于 50ml 離心管中；加入 8ml 乙qing-二氯甲*烷混合液，振蕩 2min， 4000r/min 以上，15℃離心 10min；
2、取 4ml 清澈有機相至干燥容器中，50-60℃氮氣或空氣吹干；3、用 1ml 樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物，加入正己烷 1ml。混合 30s，4000r/min 以上 15℃離心
5min；去除上層正己烷；4、取下層 50µl 液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 1 倍
（b）組織高檢測限處理方法二
1、稱取 3±0.05g 勻漿物置離心管中，先加入 3ml0.02M PB 緩沖液充分振蕩混勻，再加入 4ml 乙酸乙酯和 2ml 乙qing，充分振蕩 10min，于 15℃ 4000r/min 以上速度離心 10min；
2、移取 2ml 上層液體（約相當(dāng)于 1g 的樣本）在50-60℃氮氣或空氣吹干；
3、加入 1ml 正己烷溶解干燥的殘留物，再加入 1ml 樣本復(fù)溶液強烈振蕩 1min，室溫 4000r/min，離心 5min，除去上層正己烷；
4、取下層 50µl 液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 1 倍
（c）血清處理方法
1、將血樣本于室溫放置 30min，于 10℃，4000r/min以上離心 10min，分離出血清或過濾血清；
2、取 1ml 血清，加入 3ml 0.02 M PB 緩沖液混合，
混合 30s；3、取 50µl 液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 4 倍
（d）蜂蜜處理方法
1、稱取 2±0.05g 蜂蜜樣本于 50ml 離心管中，加入2ml 0.1M K2HPO4 溶液，渦旋震蕩 2min；
2、再加入8ml 乙酸乙脂，渦旋振蕩3min，4000r/min以上 15℃離心 10min；3、取 4ml 上層液體于 56℃下氮氣吹干，加 1ml 樣本復(fù)溶液復(fù)溶，渦旋震蕩 1min；4、取 50µl 液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 1 倍
（e）尿液處理方法
1、用 3ml0.02 M PB 緩沖液與 1ml 經(jīng)離心后的清亮尿樣本混合，混合 30s；2、取 50µl 液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 4 倍
（f）牛奶處理方法
1、取 1ml 牛奶樣本用 0.02 M PB 緩沖液按 1︰19（v/v）稀釋（即 20µl 牛奶+380µl 0.02 M PB 緩沖液），混合 30s；2、取 50µl 液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 20 倍
六、酶標(biāo)免疫分析程序:
- 測定前應(yīng)須知：
1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、 使用之后立即將所有試劑放回 2～8℃。
3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的*性，正確的洗板操作是 ELISA 測定程序中的要點。
4、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。
- 操作步驟：
1、從 2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～25℃）平衡 30min 以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于 2-8℃。
3、配液：將 40ml 20X 濃縮洗滌液用去離子水稀釋至 800ml。
4、編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中，加入酶標(biāo)記物 50µl/孔，然后再加入抗體工作液 50µl/ 孔，用蓋板膜封板，25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。
6、將孔內(nèi)液體甩干，用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 4～5 次，每次間隔 15～30 秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
7、顯色：加入底物 A 液 50µl/孔，再加入底物 B 液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色 15min。
8、測定：加入終止液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 處（建議用雙波長 450/630n m 檢測，5min 內(nèi)讀數(shù)），測定每孔 OD 值。
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第 1 種方法，定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含磺胺類藥物量成負相關(guān)。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3，樣本 2 的吸光度值為 1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：
0ppb 為 2.243； 0.4ppb 為 1.816；0.8ppb 為 1.415； 1.6ppb 為 0.74；3.2ppb 為 0.313；6.4ppb 為 0.155。
則樣本 1 的濃度范圍是 3.2ppb～6.4ppb；樣本 2 的濃度范圍是 0.8ppb～1.6ppb，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中磺胺類藥物實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個標(biāo)準(zhǔn)（0 標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以 100%，即
百分吸光度值（%）＝ B ×100%
B0
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以磺胺類藥物
標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中磺胺類藥物實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。
3、單項磺胺類檢測結(jié)果計算
將按照試劑盒計算出來的結(jié)果乘以相應(yīng)的交叉反應(yīng)率即為磺胺單項的檢測值。
八、 注意事項
1、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫（20～25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
3、混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD 值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、不用的微孔板放進自封袋重新密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、該試劑盒理想反應(yīng)溫度為 25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
九、儲藏條件和保質(zhì)期
1、儲藏條件：試劑盒于 2～8℃保存，不要冷凍。
2、保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為 1 年，生產(chǎn)日期見包裝盒。
提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實驗結(jié)果，請放心使用。
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