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瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒說明書
瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒說明書
更新時間:2018-12-25
型    號:
所屬分類:常用試劑
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1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2. 使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液,不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化納鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3. 溶膠液調(diào)制成為了黃顏色,便于觀察溶膠效果和監(jiān)測 pH 值變化從而達到較理想結(jié)合效果,大大提高回收效率。

瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒說明書產(chǎn)品概述:

瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒

Midi Purification Kit

保存條件:本試劑盒在室溫儲存 18 個月不影響使用效果。

產(chǎn)品介紹:

在高離序鹽存在的情況下,DNA 片斷選擇性的吸附于離心柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜上,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質(zhì)去除,最后用低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點:

1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2. 使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液,不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化納和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。

3. 溶膠液調(diào)制成為了黃顏色,便于觀察溶膠效果和監(jiān)測 pH 值變化從而達到較理想結(jié)合效果,大大提高回收效率。

注意事項:

1. 所有的溶液應(yīng)該是澄清的,如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀,此時不應(yīng)該直接使用,可在 37℃水浴加熱幾分鐘,即可恢復(fù)澄清。使用前應(yīng)該恢復(fù)到室溫。

2. 儲存于低溫(4℃或者-20℃)會造成溶液沉淀,影響使用效果,因此運輸和儲存均在室溫下(15-25℃)進行。

3. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化,各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

4. 溶膠液中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5. 回收純化的DNA片段一般在100bp40kb之間,過長、過短片段的回收效率降低。

6. 回收DNA的量和起始DNA的量、洗脫體積、DNA片斷大小有關(guān)。一般1-20μg, 100bp-5kbDNA片段,回收率可高達85%-95%。

7. 切膠回收時,紫外燈觀察對DNA片段有損壞作用,應(yīng)該盡可能使用能量低的長波紫外線,并且盡可能的縮短紫外線下處理的時間。

8. pH≤7.5時,吸附膜吸附DNA的效率最高。如果切下來的凝膠中含有電泳緩沖液太多,造成溶膠后溶膠液pH偏高,會導(dǎo)致回收率降低。溶膠后,如果溶膠液依舊保持黃色,說明pH正常;如果變成橘紅色或者淡紫色,說明pH偏高,可在膠充分溶解后加5-10μl   3M醋酸鈉(pH5.2)將pH值調(diào)到5-7(黃色。

9. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA, 不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫, 但應(yīng)該確保pH大于7.5, pH過低影響洗脫效率。用水洗脫,DNA片段應(yīng)該保存在-20℃。DNA片段如果需要長期保存,可以用TE緩沖液洗脫10mM Tris-HCl,1mM EDTApH 8.0,但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng),使用時可以適當(dāng)稀釋。

自備試劑:無水乙醇

操作步驟:

提示:*次使用前請先在漂洗液 WB 中加入量無水乙醇,加入后請及時打鉤標(biāo)記已加入乙醇,以免多次加入!

1. 在長波紫外燈下,用干凈刀片將所需回收的 DNA 條帶切下,盡量切除不含 DNA 的凝膠,得到凝膠體積越小越好。

2. 將切下的含有 DNA 條帶凝膠放入 1.5ml 離心管,稱重。

3. 3 倍體積溶膠液 DD。凝膠重為 100mg,則加入 300μl 溶膠液)如果凝膠濃度大于 2%,應(yīng)加入 6 倍體積溶膠液。

4.56℃水浴放置 10min(或直至膠*溶解。每 2-3min 渦旋震蕩一次加速溶解。

5. 可選,100mg 最初的凝膠重量加入 150μl 的異丙醇,震蕩混勻。

6. 將上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中(吸附柱放入收集管中,室溫放置 1min,12,000rpm 離心 30-60sec,倒掉收集管中的廢液。

7. 加入 500μl 漂洗液 WB  (請先檢查是否已加入無水乙醇!,12,000rpm  離心 30sec,棄掉廢液。

8. 重復(fù)操作步驟 7。

9. 將吸附柱 EC 放回空收集管中,12,000rpm 離心 2min,盡量去除漂洗液,以免漂洗液中殘留的乙醇抑制下游反應(yīng)。

10 取出吸附柱 EC,放入一個干凈的離心管中,室溫放置數(shù)分鐘。

11.在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩沖液 EB(洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好,室溫放置 2min12,000rpm  離心

1min。如果需要較多量 DNA,可將得到的溶液重新加入吸附柱中,離心 1min。(注意:洗脫體積不應(yīng)小于 30μl,體積過少影響回收效率)

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