高純度質(zhì)粒小量快速提取試劑盒
HighPure Rapid Mini Plasmid Kit
保存條件:本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 18 個(gè)月不影響使用效果。
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒采用改進(jìn) SDS-堿裂解法裂解細(xì)胞,離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高鹽、低
pH 值狀態(tài)下選擇性地結(jié)合溶液中的質(zhì)粒 DNA,再通過(guò)去蛋白液和漂洗液將雜質(zhì)和其它細(xì)菌成分去除,最后低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2. 獨(dú)有的去蛋白液配方,可以高效去除殘留的核酸酶,即使是核酸酶含量豐富的菌株如 JM 系列、HB101 也可以輕松去除。有效防止了質(zhì)粒被核酸酶降解。
3. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。
自備試劑:無(wú)水乙醇操作步驟:
*次使用前請(qǐng)先在漂洗液 WB 和去蛋白液 PE 瓶中加入量無(wú)水乙醇,充分混勻,加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇,以免多次加入!
將 RNase A 全部加入溶液 P1 中,混勻,每次使用后置于 2-8℃保存。
將溶液 P3 放在冰上預(yù)冷,可以提高產(chǎn)量。
1. 向吸附柱AC 中(吸附柱放入收集管中)加 500μl 的平衡液BL,12,000rpm 離心 1 min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
2. 取 1.5-4.5ml 過(guò)夜培養(yǎng)的菌液,12,000rpm 離心 30 sec,盡可能的倒干上清,收集菌體。收集超過(guò)1.5 ml 菌液, 可以離心棄上清后,在同一個(gè) 1.5ml 管內(nèi)加入更多的菌液,重復(fù)步驟 1,直到收集到足夠的菌體。
3. 用 250μl 溶液 P1 重懸菌體沉淀,渦旋振蕩至*懸浮。
4. 加 250μl 的溶液 P2,溫和地上下翻轉(zhuǎn) 4 -7 次使菌體充分裂解。
5. 加 350μl 溶液 P3,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 4 -7 次,充分混勻時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀,
13,000rpm 離心 10 min,小心取上清。加入溶液 P3 后應(yīng)該立即混勻,以免產(chǎn)生 SDS的局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清
6. 將上一步所得上清加入吸附柱 AC 中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm 離心 30-60sec,倒掉收集管中的廢液可選步驟:加入 500μl 去蛋白液 PE,12,000rpm 離心 30-60sec,棄廢液。此步驟為了去除痕量核酸酶等雜質(zhì),如所用菌株為 JM 系列、HB101 等 endA 菌株或野生型菌株,核酸酶含量豐富,應(yīng)加此步驟;如所用菌株為 XL-1 Blue 和 DH5α等缺陷型菌株,核酸酶含量低,則可略過(guò)此步驟。
7. 加入 500μl 漂洗液 WB(請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!),12,000rpm 離心 30 sec,棄掉廢液。
8. 重復(fù)步驟 7。
9. 將吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 離心 2 min,盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
10.取出吸附柱 AC,放入一個(gè)干凈的離心管中,室溫放置幾分鐘。
11.在吸附膜的中間部位加 50μl-100μl 洗脫緩沖液 EB(洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好),室溫放置 2 min,12,000rpm 離心 1 min。如果需要較多量質(zhì)粒,
可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,離心 1 min。洗脫體積越大,洗脫效率越高。如果需要質(zhì)粒濃度較高,可以適當(dāng)減少洗脫體積, 但是最小體積不應(yīng)少于 50μl, 體積過(guò)小降低質(zhì)粒洗脫效率,減少質(zhì)粒產(chǎn)量。若用ddH2O 做洗脫液,應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi),pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率。