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葡萄糖-6-磷酸脫氫酶
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶
更新時(shí)間:2018-03-10
型    號:
所屬分類:酶和輔酶(Sigma原裝)
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葡萄糖-6-磷酸脫氫酶
介紹:通過G6PD獲得NAPDH,通過檢測340nm處NADPH吸光度增高速率,計(jì)算酶的活性。
儲(chǔ)存條件:-20℃,避光,6個(gè)月
用途:簡易法檢測(6GPD)活性

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶產(chǎn)品概述:

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)檢測試劑盒(簡易微板法)

 

產(chǎn)品簡介:

 

葡糖-6-磷酸脫氫酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase,G-6-PD  G6PD)是糖酵解途徑、檬酸循環(huán)以外的另一個(gè)葡萄糖分解途徑的磷酸葡萄糖酸途徑(磷酸戊糖途徑)

 

的*個(gè)(EC1.1.1.49)。

 

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)檢測試劑(易比色法)檢測原理是紅細(xì) G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-內(nèi),后者快氧化成 6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA),同時(shí) NAPD 原成 NADPH,其反應(yīng)公式如下:

 

G-6-P+NAPD+  6-PGA+L-NADPH

 

在上述偶聯(lián)應(yīng)中,NADPH 生成速率本中活性呈正比,通過酶標(biāo)儀或自分析

 

 340nm 處檢測吸光度升高速率( A/min),升高速率( A/min) G-6-PD 活性呈正,直接計(jì)的活性位。100T 該試劑試劑可以檢測 50 本,該試劑用于科研領(lǐng)

 

域,宜用于斷或其他用途。

 

產(chǎn)品組成:

 

 

 

 

試劑(A): 本稀

30ml

-20℃ 避光

試劑(B): G6PD assay buffer

30ml

4℃

試劑(C): NADP

9mg

-20℃

試劑(D): G-6-P

1

-20℃

試劑(E): G-6-P

10ml

RT

 

 

 

 

自備材料:

 

1、生理

 

2、水浴

 

3、96 孔板

 

4酶標(biāo)儀

 

 

操作步驟(供參考)

 

1、準(zhǔn)溶血液:取新抗凝血,離心取上清及白細(xì),用 4℃預(yù)冷的生理水洗 2 次,

 

次取上清時(shí),務(wù)必去除剩余的白細(xì),再加預(yù)冷的生理水配成含紅細(xì)壓積為

 

 

 

30%紅細(xì)液,4℃保存用。用前,以本稀液稀 25 倍,即溶血液。4℃

 

保存 10h,-20℃保存 48h

 

2、配制 NADP 儲(chǔ)存液:取 9mg NADP 溶解于 1ml G6PD assay buffer,充分混勻,配制

 

 NADP 儲(chǔ)存液(9mg/ml)-20℃保存用。

 

3、配制檢測工作液:取 NADP 儲(chǔ)存液和 G6PD assay buffer,按 NADP 儲(chǔ)存液(9mg/ml)

 

G6PD assay buffer=149 的比例混合,即為檢測工作液。-20℃保存,一個(gè)月有效。4、配制 G-6-P 工作液:取 G-6-P 1 支溶解于 G-6-P  10ml,混勻,即 G-6-P

 

作液,分裝成小份后,-20℃保存用。

 

5、分光光度計(jì)檢測:按照下表設(shè)置空白管、定管,溶液應(yīng)按照序依次加入,并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果品中的活性高,可以減少品用量或適當(dāng)稀后再進(jìn)定。

 

加入物

空白管

定管

檢測工作液(μl)(37℃預(yù))

220

220

G6PD assay buffer (μl)

5

溶血液(μl)

5

混勻,37℃孵育 10min。

 

G-6-P 工作液(μl)

25

25

 

混勻,37℃孵育 60s,在 340nm  1-3min 各管吸光度

 

化,計(jì)算各管  A/min

 

6、生化分析儀檢測:按照下表設(shè)置主要參數(shù)。如果品中的活性高,可以減少品用

 

量或適當(dāng)稀后再進(jìn)定。

 

340nm

應(yīng)溫度

37℃

孵育時(shí)間

90s

連續(xù)監(jiān)測時(shí)間

60s

比色杯光徑

1.0cm

系數(shù)

8040

測樣

6μl

檢測工作液

264μl

G-6-P 工作液

33μl

 

 

計(jì)算:

 

6

   分光光度計(jì)計(jì)算公式:G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(250/5)= A/min×8040

式中:6220=NADH 的吸光度250=應(yīng)液的(μl) 5=測樣品體(μl)

 

 

生化分析儀計(jì)算公式:G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(303/6)= A/min×8040

 

6

 

式中:  A/min=定的 340nm 吸光度的升高速率

 

6220=NADH 的吸光度303=應(yīng)液的(μl) 6=測樣品體(μl)

 

參考范圍:

 

成年健康人紅細(xì) G6PD8-18U/g Hb

 

 

注意事項(xiàng):

 

1、 血清中 G6PD 活性在室溫可以保存 2 天,4℃保存 1 周,-20℃保存 1 個(gè)月。

 

2、 嚴(yán)重黃疸、脂血或溶血的血清,可能會(huì)引起定管吸光度增高。

 

3、 了您的安全和健康,穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

有效期:6 個(gè)月有效。

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