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牛外周血單個核細胞分離液
牛外周血單個核細胞分離液
更新時間:2023-06-29
型    號:LDS1084
所屬分類:細胞分離液
報    價:400
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LDS1084牛外周血單個核細胞分離液本品為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是Ficoll 400與泛影酸葡甲胺。適用于從血液分離所需細胞,在醫(yī)療和醫(yī)學生物學研究中廣泛應用。其他人及動物多種比重細胞分離液。注:因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同,所以用戶在定制分離液時應提供所需分離液的比重、動物的種屬及被分離細胞的名稱。

牛外周血單個核細胞分離液產品概述:

牛外周血單個核細胞分離液

為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是 Ficoll 400 與泛影酸葡甲胺。適用

于從血液或組織中分離單個核細胞,在醫(yī)療和醫(yī)學生物學研究中廣泛應用。

其他人及動物多種比重細胞分離液。注:因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數(shù)及

細胞帶電不同,所以用戶在定制分離液時應提供所需分離液的比重、動物的種屬及被分離細

胞的名稱。

牛外周血分離液產品目錄

1. 適用于各種動物血液及組織本系列產品檢索

2. 相關試劑及耗材

3. 注意事項

4. 應用

5. 產品性能指標

6. 貯藏及保存期限

7. 實驗前準備

8. 使用方法說明及圖例

8.1 血液樣本分離液使用說明及圖例

8.2 組織分離液使用說明及圖例

9. HES-TBD550 使用說明

10. 組織單細胞懸液的制備

11. 生產企業(yè)

12. 參考文獻

1. 適用于各種動物血液及組織 于各種動物血液及組織本系列產品檢索:::

貨號                     品牌              產品名稱          規(guī)格         報價

HY2011HTBD馬外周血單核細胞分離液試劑盒4*50ml600
HY2011PTBD馬臟器組織單核細胞分離液試劑盒4*50ml600
TBD2011GTBD羊外周血單核細胞分離液試劑盒4*50ml600
TBD2011GPTBD羊臟器組織單核細胞分離液試劑盒4*50ml600
TBD2011FTBD魚全血單核細胞分離液試劑盒4*50ml600
TBD2011FPTBD魚臟器組織單核細胞分離液試劑盒4*50ml600
中性粒細胞分離液試劑盒    
LZS11131TBD人中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS1091TBD大鼠外周血中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS1091P1TBD大鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS1100TBD小鼠外周血中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS1100PTBD小鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS11133TBD兔外周血中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS11133PTBD小鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS1087TBD狗外周血中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS1087PTBD狗臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS1094TBD牛外周血中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS1094PTBD牛臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS1093TBD豚鼠外周血中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS1093PTBD豚鼠臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600
LZS1098CTBD雞外周血中性粒細胞分離液試劑盒4*50ml600

3. 注意事項

A 本分離液是敏光型的,在運輸和貯藏過程中應在 18-25避光保存,啟封后置 4

℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于 10 以下易出現(xiàn)白色結晶,

影響分離效果。

B 待分離的血液、組織及細胞要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一

定在20水浴箱中復溫20分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2時分離效果,

且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。

C 由于各品牌離心機的性能不同,國內南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響

分離效果,用戶可以調節(jié)離心轉數(shù),調節(jié)離心的時間,摸索*的分離條件(具體分離條件

各實驗室自定)。

D 使用無靜電反應的離心管,推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。

E *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑

體積。

 F 分離過程中所用其他試劑如:羥乙已基淀粉 550、全血及組織稀釋液、細胞洗滌液及

紅細胞裂解液等以我公司產品為*選擇,本公司相關系列產品無菌、無病毒、無支原體、

低內毒素水平且無細胞毒性,所獲得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。

4. .

適用于從各種動物血液或組織中分離單個核細胞。

5.. . . 產品性能指標

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

內毒素 0.5...EU/ml

無菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下,,,含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下

6.. . . 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限

18-25避光保存,有效期兩年。啟封后置 4保存,有效期一周。

注::::若保證無微生物污染,啟封后可置 4長期保存。但應注意保存溫度較低時本分離液易出現(xiàn)白色結晶,影響分離效果。

7. 實驗材料 7. 實驗材料

A 試劑

單個核細胞分離液、全血及組織稀釋液、細胞洗滌液、羥乙已基淀粉 550、胎牛血清

B 器材

玻璃離心管、玻璃滴管水平轉子離心機、無菌工作臺

8.. . . 使用方法說明及圖例 使用方法說明及圖例

8.1. 血液樣本分離液使用說明及圖例

A. 小量分離 A. 小量分離-使用 1-2ml 新鮮抗凝血(分離圖例見圖例 (分離圖例見圖例 1)::

a. 取新鮮抗凝血 1-2ml,與全血及組織稀釋液(Cat#2010C11191:1 混勻;

b. 小心加于與混合液等體積的細胞分離液之液面上;

c. 400g(約 1500 /分)離心 15 分鐘(半徑 15cm 水平轉子);

此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;;;為環(huán)狀乳白色 ;為環(huán)狀乳白色單個核細胞層。。。。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含 4-5ml細胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 /分)離心 20分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌 2 次即得所需細胞。

B. 中量分離 B. 中量分離-使用 5-10ml 新鮮抗凝血(分離圖例見圖例 (分離圖例見圖例 1)::

a. 取新鮮抗凝血 5-10ml,與全血及組織稀釋液(Cat#2010C11191:1 混勻;

b. 將混合液小心疊加于細胞分離液之液面上(混合液:::分離液 =2===:::1);

c. 500g(約 1800 /分)離心 15 分鐘(半徑 15cm 水平轉子);

此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;;;為環(huán)狀乳白色 ;為環(huán)狀乳白色單個核細胞層。。。。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含 10ml細胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 /分)離心 20分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌 2 次即得所需細胞。

C. 大量分離 C. 大量分離 I-使用 20ml 新鮮抗凝血(分離圖例見圖例 (分離圖例見圖例 2)::

a. 取新鮮抗凝血 20ml 200g(約 1100 /分)離心 20 分鐘棄去血漿;

b. 向棄去血漿的血細胞 棄去血漿的血細胞中加入全血及組織稀釋液(Cat#2010C111912ml 小心混勻;

c. 將混合液小心疊加于細胞分離液之液面上(混合液:::分離液 =2===:::1);

d. 600g(約 2000 /分)離心 15 分鐘(半徑 15cm 水平轉子);

此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;;;為環(huán)狀乳白色 ;為環(huán)狀乳白色單個

核細胞層。。。。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含 20ml

細胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 /分)離心 20分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌 2 次即得所需細胞。

D. 大量分離 D. 大量分離 II-使用 50ml 新鮮抗凝血(分離圖例見圖例 (分離圖例見圖例 3)::

 a. 取新鮮抗凝血50ml HES 50ml HES----TBD550 1:1 混合后再與 1 份注射用生理鹽水混勻 20-30

℃靜置 20-30 分鐘。吸取混濁的上清液備用,棄去底部紅細胞。

 b. 將步驟 1 中留取的上清液以 200g(約 1100 /分)離心 20 分鐘棄去上清保留沉淀細

胞;

c. 向沉淀的細胞中加入全血及組織稀釋液(Cat#2010C111920ml 小心混勻;

d. 將混合液小心疊加于細胞分離液之液面上(混合液:::分離液 =2===:::1);

e. 600g(約 2000 /分)離心 15 分鐘(半徑 15cm 水平轉子);

此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為血漿層。第二層;;;為環(huán)狀乳白色 ;為環(huán)狀乳白色單個

核細胞層。。。。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含 20ml

細胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 /分)離心 20

分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌 2 次即得所需細胞。

注::::提取率約為 80%。。。。

 血液(人)中各細胞含量參考值 中各細胞含量參考值:::

男:4.0-5.5×1012/L(400-550 萬個/mm3

)

女:3.5-5.0×1012/L(350-500 萬個/mm3 紅細胞 )

新生兒:6.0-7.0×1012/L(600-700 萬個/mm3

)

成人:4.0-10.0×109

/L(4000-10000 /mm3

) 白細胞 新生兒:15.0-20.0×109

/L15000-20000 /mm3

)

血小板 100-300×109

/L10 -30 萬個/mm3

)

名稱 占白細胞總數(shù)百分比 占白細胞總數(shù)百分比

嗜中性粒細胞 30%-70%

嗜酸性粒細胞 0.5%-5%

嗜堿性粒細胞 0%-1%

淋巴細胞 20%-40%

白細胞分

類計數(shù)

單核細胞 3%-8%

分離圖例 3

抗凝血 50ml HES-TBD550 11 混合后再與 1 份注射用生理鹽水混勻 20-30靜置 20-30 分鐘

8.2 組織分離液使用說明及圖例 8.2 組織分離液使用說明及圖例

A.取組織勻漿單細胞懸液(細胞濃度為 2×108

-1×109/ml,具體制備方法參照“10.組織

單細胞懸液的制備”)2ml,小心加于 2ml 細胞分離液之液面上;

B.以 400g(約 1500 /分)離心 15 分鐘(半徑 15cm 水平轉子);

此時離心管中由上至下細胞分為四層。*層;為胎牛血清液層。第二層;;;為環(huán)狀乳白色 ;為環(huán)狀乳白色單

個核細胞層。。。第三層;為透明分離液層。第四層;為紅細胞層。收集第二層細胞放入含 4-5ml

細胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 /分)離心 20

分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復洗滌 2 次即得所需細胞。

9. HES. . HES-TBD550 使用說明

HES 是從支鏈淀粉衍生出來的,是富含淀粉的復合物,其生理和化學特性主要由羥乙已基

取代度即取代級、平均分子量決定。大量實驗表明平均分子量越大對紅細胞的凝集作用越強,

有效提高紅細胞的沉降速度,從而使紅細胞與其它細胞分離。故而,使用 HES-TBD550(羥

乙已基淀粉 550)沉淀法是一種高效的細胞分離方法。

間充質干細胞(mesenchymal stem cells ,MSCs) 是指一群可向成骨細胞、成脂肪細胞、

骨髓基質細胞、肝臟細胞、心肌細胞和神經細胞等多種細胞分化的多潛能組織干細胞,是在

細胞治療、基因治療中有效發(fā)揮作用的理想工程細胞。MSCs 不僅存在于骨髓,也可從臍血、

外周血中以及脂肪組織、肌肉、胎兒器官、大腦、牙齒中分離。UCB - MSCs 的分離、篩選、

增殖、分化與臍血樣本的選擇、培養(yǎng)基的差異以及分離、擴增分化過程中操作技術等多種因

素有關。目前用于 UCB - MSCs 分離的方法有:貼壁篩選法、密度梯度離心法、流式細胞儀

法和免疫磁珠法。流式細胞儀法對細胞損傷較大,免疫磁珠法價格相對較貴且由于抗原抗體

反應也容易改變細胞原有特性,而 HES-TBD550(羥乙已基淀粉 550)聯(lián)合密度梯度離心法常與貼壁篩選法結合使用,可提高所得 UCB - MSCs 的純度,目前研究多采用此法。國內不少學者采用羥乙已基淀粉沉淀紅細胞,然后再進行離心分離單個核細胞,也取得不錯結果。實驗證明采用隨機數(shù)字表法,將每份臍血隨機分入兩個不同處理組,從而將臍血樣本的個體差異減小到zui小程度。結果證實,HES-TBD550(羥乙已基淀粉 550)聯(lián)合密度梯度離心法獲得的有核細胞數(shù)量明顯多于 FICOLL 密度梯度離心法。本實驗采用的羥乙已基淀粉商品名為

HES-TBD550(羥乙已基淀粉 550),克分子滲透壓為 308mosmL,膠體滲透壓為 6836 mmHg,可影響紅細胞集聚性沉降率。紅細胞集聚是可遞性橋接結構形成的結果,由大的 HES-TBD550(羥乙已基淀粉 550)分子處在紅細胞之間聯(lián)接而成。HES-TBD550(羥乙已基淀粉 550)同時還阻礙白細胞和內皮細胞的黏附,并使平均血小板容積呈現(xiàn)微弱地降低,從而有輕度抑制血小板集聚的功能。臍血經 HES-TBD550(羥乙已基淀粉 550)處理后,可使紅細胞沉積至試管底,對其它主要成分包括干細胞無影響。經這樣處理后,實驗時間相對較短(平均為 1.5 h),步驟相對較少,細胞污染幾率小,從而使細胞數(shù)損失減少。結論證明,與相應的干細胞分離液聯(lián)合分離使用羥乙已基淀粉沉淀法是一種高效的臍血干細胞分離方法。

10.. . . 組織單細胞懸液的制備 組織單細胞懸液的制備

注::::A.. .. 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法,,,酶消化法由于各實驗室選取的消 ,酶消化法由于各實驗室選取的消

化酶種類各不相同,,,,請各實驗室自行選擇進行試驗B.. .. 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境。。。

剪碎法:::將組織塊放入平皿后 ,加入少量組織勻漿液及 20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,加入 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用 100 目不銹鋼濾網(另購)過濾到試管內;離心沉淀1500/分×3 min,再用細胞洗滌液清洗3次,每次以500rpm短時低速離心除去細胞碎片,以 200 目不銹鋼濾網(另購)過濾去細胞團塊。作細胞計數(shù)并調整細胞濃度為(25)×107/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109/ml 的單細胞懸液備用。 勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內,加入 2ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清;緩慢轉動研棒,研磨至勻漿;用 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清沖洗研器;收集細胞懸液,經 200 目不銹鋼濾網(另購)過濾;離心沉淀 800rpm×2min ,再用細胞洗滌液洗 3 次,離心沉淀。作細胞計數(shù)并調整細胞濃度為(25)×107/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109 /ml 的單細胞懸液備用。

細胞計數(shù)方法: 細胞計數(shù)法是用來計數(shù)細胞懸液中細胞數(shù)量的一種方法。一般利用計數(shù)板(血球計數(shù)板)進行。既可用于分離(散)細胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,也可用于對培養(yǎng)物的細胞數(shù)量進行計數(shù)。不論計數(shù)的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。 計數(shù)與計算過程

1)、在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)的蓋玻片。

2)、用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,至

蓋玻片被液體充滿為止。

3)、置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內的細胞總數(shù)。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者,

對于細胞團按單個細胞計數(shù)。

4)、按下式計數(shù)細胞懸液的密度:

細胞密度=(4 個大格細胞總數(shù)/4)×104/ml×稀釋倍數(shù)

公式中乘以 104因為計數(shù)板中每一個大格的體積為:

1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3

  1ml1000mm3

細胞計數(shù)要點:::

A 進行細胞計數(shù)時,要求懸液中細胞數(shù)目不低于 104/ml,如果細胞數(shù)目很少要進行離

心再懸浮于少量培養(yǎng)液中;顯微鏡下計數(shù)時,遇到 2 個以上細胞組成的細胞團,應按單個細

胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分; 或細胞數(shù)<200 /10mm2>500 /10 mm2 時,說明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。

B 要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數(shù)準確性。

C 取樣計數(shù)前,應充分混勻細胞懸液,尤其是多次取樣計數(shù)時更要注意每次取樣都要混

勻,以求計數(shù)準確;

D 數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞,若細胞聚集成團時,只按照一個細胞計算。如果細

胞壓在格線上時,則只計上線,不計下線,只計左線,不計右線。

E 操作時,注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計數(shù)。

初學者易犯的錯誤:::

A 計數(shù)前未將待測懸液吹打均勻。

B 滴入細胞懸液時蓋玻片下出現(xiàn)氣泡。

C 滴入懸液時的量太多,至使細胞懸液流入旁邊的槽中。

11. . . . 生產企業(yè)

12. . . . 參考文獻

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