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CCK-8試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反響的完結(jié)需求有一定的溫度,這一保溫進程稱為溫育,有人稱之為孵育,在本產(chǎn)品中似不恰當(dāng)。
保溫的方法除有的附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴,可將其置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,本產(chǎn)品應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,終將ELISA板放在濕紗布上。
CCK-8試劑盒步驟:
1、從室溫平衡20分鐘后的鋁箔袋中取出所需酶標板孔數(shù)目,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2、標準品和樣本加樣:設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL,空白孔不加。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、加酶:標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔。
4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
5、配液:將20X濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍后備用。
6、洗滌:小心揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次。
7、顯色:每孔加入底物A、B各50μL,輕輕震蕩混勻后,37℃避光孵育15min。
8、終止:每孔加入終止液50μL,終止反應(yīng),此時藍色立刻轉(zhuǎn)為黃色。
9、測定:以空白孔調(diào)零,15分鐘內(nèi)在450nm波長處測定各孔的吸光度(OD值)。