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ELISA試劑盒的實驗中操作細節(jié)要有哪些?
更新時間:2020-06-20 點擊次數(shù):2721次
   ELISA試劑盒實驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。
  1.保持每次加樣的兩步要有太大的差異,所以有條件的應(yīng)該考慮使用排槍。
  2.槍內(nèi)有氣泡應(yīng)該先快速打空槍,將氣泡排出。
  3.板內(nèi)有氣泡可以考慮用空槍將其吸出,不過小心不能碰到底板!
  4.盡量用排槍,做好筆記,一次做完,避免下次還要做標(biāo)準(zhǔn)。
  5.加完現(xiàn)色液后,放入一個可推拉的抽屜內(nèi),就可以避光振蕩了。
  操作注意:
  1.吸取樣品時,加樣槍吸頭不應(yīng)黏附多余的液體;加樣時不可90度向孔中滴加液體,這樣會導(dǎo)致液體殘留在吸頭上,加樣不準(zhǔn)確。
  2.不要將吸頭伸入孔中,一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭,另一方面可能會將孔中的液體吹起來,加樣不準(zhǔn)確。
  其實給ELISA試劑盒樣本加樣并不是什么大問題,很多事情往往是被操作者們給想復(fù)雜了,只要有足夠的耐心與認(rèn)真,就一定可以做出漂亮的實驗!
  在ELISA試劑盒試驗中的各項操作細節(jié)有許多,如盡量少用排槍、勤換槍頭,細節(jié)決定成敗,這對于試驗室科研工作者來說也是如此。加樣時由低濃度向高濃度加,由于這樣能夠削減跳孔的幾率。而整個試驗的*后要害便是成果的處理辦法了,那么在在今日的技術(shù)文章中。
  為您帶來的是ELISA試劑盒成果分析辦法:
  1:ELISA試驗中樣品都要做復(fù)孔或三孔,然后計算每個濃度規(guī)范品的均勻OD值,復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
  2:均勻OD值減去空白孔的OD值。
  3:制造規(guī)范曲線。
  以減去本底后的OD值為X軸,規(guī)范品的濃度為Y軸,運用作圖軟件得出一個適宜的計算辦法。主張運用適宜的軟件來作圖,比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中挑選一條*適宜的方程。要想檢驗?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)符合,能夠?qū)⒁?guī)范品的濃度作為未知數(shù),將對應(yīng)的OD值帶入該方程,計算出規(guī)范品的濃度,得到的成果應(yīng)該與實際濃度很挨近(+/-10%)。挑選擬合度的那條曲線。
  如果呈現(xiàn)規(guī)范曲線的線性欠好,或平行性欠好(雙孔對照孔的OD值不同很大),或呈現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象,可能引起的原因有酶標(biāo)板孔間彼此污染、洗板后未能盡快進行下一步操作、添加樣品或其它試劑時操作的辦法不對、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸騰、酶標(biāo)板孔問參加的試劑量不同,相對應(yīng)的解決辦法是加樣時請當(dāng)心勿將液體濺人另一孔中,人工洗板時也請當(dāng)心,勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、添加試劑時請懸空滴入,牢記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi),吸取不同試劑瓶中的液體時就要替換一次槍頭、確認(rèn)孵育環(huán)境不透光,蓋板膜將酶標(biāo)板密封好、運用已校正過的微量加樣器,如將次參加液體時槍頭上留有一滴的液體滴下,那么將今后槍頭上留有的液體也滴下,以保證參加液體體積的一致性。

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