CCK-8試劑盒實(shí)驗(yàn)原理和操作步驟詳解
Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），CCK-8試劑盒適用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
CCK-8試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：
WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
CCK-8試劑盒用途：
CCK-8法應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增 殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測等。
CCK-8試劑盒用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗(yàn)。那么用于細(xì)胞毒性測定的操作步驟是什么呢？
方法/步驟1:
在96孔板中配制100μl 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí) (在 37℃，5% CO2 的條件下)。
方法/步驟2:
向培養(yǎng)板加入 10μl 不同濃度的待測物質(zhì)。
方法/步驟3:
將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 6,12, 24 或 48 小時(shí))。
方法/步驟4:
向每孔加入 10μl CCK8 溶液（Engreen） (注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù))。
方法/步驟5:
將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。
方法/步驟6:
用酶標(biāo)儀測定在 450 nm 處的吸光度。
方法/步驟7:
如果暫時(shí)不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μl 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
以上就是CCK-8試劑盒的相關(guān)使用說明，以供參考！
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