利用
CCK-8試劑盒試驗的兩種方法分享
在細胞培養(yǎng)實驗過程中，大家是不是總會好奇別人家的實驗總是做的又快又好，而自己做的實驗又慢又難得做出自己滿意的結(jié)果，搞得一天到晚也挺忙的，心想：我也很努力很認真啊，為啥效率總提不起來呢？
其實，有時候并不是自己不努力，只是沒有找對方法。做實驗可不能光是埋頭苦干，還要學會運用合適的檢測試劑盒，這樣就能事半功倍。
如果你還在用MTT，那就真的OUT了，MTT花4小時才能得到的結(jié)果用CCK-8試劑盒只需1小時，CCK-8試劑盒可用于細胞增殖和毒性分析，同MTT法相比，CCK-8試劑盒即開即用，檢測時間大概在1小時左右。
不僅如此，CCK-8試劑盒對細胞的毒性極小，*可以測完細胞增殖或藥物毒性后再繼續(xù)用細胞進行下游實驗。下面小編就來為大家介紹一下CCK-8試劑盒的具體情況。
CCK-8試劑盒基本原理
基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。
CCK-8試劑盒產(chǎn)品用途
主要用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。
細胞毒性檢測的實驗對比
CCK-8試劑盒的實驗方法與步驟
☆實驗一：細胞活性檢測
1.收集對數(shù)期細胞，調(diào)整細胞懸液濃度，96孔板每孔加入100μL，使待測細胞調(diào)密度至（1,000~10,000）/孔。
2.5%CO2，37℃培養(yǎng)細胞24小時（培養(yǎng)時間根據(jù)細胞種類的不同和每孔內(nèi)細胞數(shù)量的多少而異）。
3.每孔加入10μLCCK-8試劑盒溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200μL，則需加入20μLCCK-8試劑盒溶液，其它情況以此類推。
4.在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5~4小時，對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定（一般情況下，白細胞較難顯色，因此需要較長的CCK-8試劑盒反應時間或增加細胞數(shù)量。懸浮細胞與貼壁細胞相比較難顯色。對于貼壁細胞，CCK-8試劑盒的培養(yǎng)時間一般為1~4小時，注意：CCK-8試劑盒的*反應時間以具體顯色的*時間為準）。初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。
5.在450nm測定吸光度。
☆實驗二：細胞增殖-毒性檢測
1.收集對數(shù)期細胞，調(diào)整細胞懸液濃度，96孔板每孔加入100μL，使待測細胞調(diào)密度至（1,000~10,000）/孔。
2.5%CO2，37℃培養(yǎng)細胞24小時（培養(yǎng)時間根據(jù)細胞種類的不同和每孔內(nèi)細胞數(shù)量的多少而異）。
3.加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如6、12、24或48小時）。
4.每孔加入10μLCCK-8試劑盒溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200μL，則需加入20μLCCK-8試劑盒溶液，其它情況以此類推。
5.在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5~4小時，對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定（一般情況下，白細胞較難顯色，因此需要較長的CCK-8試劑盒反應時間或增加細胞數(shù)量。懸浮細胞與貼壁細胞相比較難顯色。對于貼壁細胞，CCK-8試劑盒的培養(yǎng)時間一般為1~4小時，注意：CCK-8試劑盒的*反應時間以具體顯色的*時間為準）。初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。
6.在450nm測定吸光度。
執(zhí)照.jpg)
