綿羊白細(xì)胞介素1β(IL-1β)ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū) |
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本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷 綿羊(Sheep)白細(xì)胞介素1β(IL-1β) ELISA檢測(cè)試劑盒 使用說(shuō)明書(shū) 檢測(cè)原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被白細(xì)胞介素1β(IL-1β)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素1β(IL-1β)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。 樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 自備物品 1. 酶標(biāo)儀(450nm) 2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒溫箱 操作注意事項(xiàng) 1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。 2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。 3. 濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白;按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。 4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。 5. 所有液體組分使用前充分搖勻。 試劑盒組成
注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0、15、30、60、120、240 pg/mL 試劑的準(zhǔn)備 20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。 洗板方法 1. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。 2. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。 操作步驟 1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。 2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL; 3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。 4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。 6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。 結(jié)果判斷 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn),按曲線(xiàn)方程計(jì)算各樣本濃度值。 試劑盒性能 1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。 2. 靈敏度:最DI檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。 3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。 4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。 5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。 6. 有效期:6個(gè)月 從2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶(hù)各類(lèi)實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色,是客戶(hù)您值得信賴(lài)的科研合作伙伴! 如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。
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