口蹄疫病毒(通用型)檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)說(shuō)明書 |
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口蹄疫病毒(通用型)檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)說(shuō)明書 【產(chǎn)品名稱】 通用名稱:口蹄疫病毒(通用型)檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法) 英文名稱:Foot and Mouth Disease Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method) 【包裝規(guī)格】 25T/盒 & 50T/盒 【預(yù)期用途】 口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,F(xiàn)MDV) 屬于小RNA病毒科,口蹄疫病毒屬,主要侵害偶蹄獸,有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia-I七個(gè)血清型??谔阋甙l(fā)病以發(fā)熱、口腔黏膜及蹄部和乳房皮膚發(fā)生水泡和潰爛為特征,是獸疫局規(guī)定的A類傳染病,易通過(guò)空氣傳播,傳染性強(qiáng),流行迅速,偶爾感染人。由于口蹄疫傳播迅速、難于防治、補(bǔ)救措施少,被稱為畜牧業(yè)的“*殺手”。 本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理,定性檢測(cè)口蹄疫通用型病毒,對(duì)口蹄疫病毒引起的偶蹄獸類病的診斷和監(jiān)控具有重要指導(dǎo)意義。 【檢驗(yàn)原理】 本試劑盒針對(duì)口蹄疫病毒通用型的高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含口蹄疫病毒通用型基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出,實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。 【主要組成成份】
注:陰性對(duì)照為偶蹄獸類基因組DNA,陽(yáng)性對(duì)照為失去活性的口蹄疫病毒cDNA。 【儲(chǔ)存條件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期12個(gè)月。 【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列、湖南潤(rùn)美系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。 【樣本要求】 新鮮采集的咽拭子、皰疹液和糞便標(biāo)本,并使用滅菌生理鹽水懸浮。 2.應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。 3.標(biāo)本收集后可立即檢測(cè);若不能立即檢測(cè),可置于2~8℃冷藏過(guò)夜保存;如需長(zhǎng)期保存,標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下,避免反復(fù)凍融。 【檢驗(yàn)方法】 1. 試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū)) (1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體。 (2)核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量。 n =陰性對(duì)照數(shù)(1T)+陽(yáng)性對(duì)照數(shù)(1T)+誤差預(yù)留量(1T)+樣本數(shù)
(3)在無(wú)菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。 2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū)) 用本公司病毒核酸提取試劑盒提取RNA,具體操作按照其試劑盒說(shuō)明書操作。 3.加樣 在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測(cè)標(biāo)本RNA各5 μL、終體積25 μL/管,蓋好PCR反應(yīng)管蓋,混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照品,終體積為25 μL/管,蓋好PCR反應(yīng)管蓋,混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。 4. PCR(PCR擴(kuò)增區(qū)) (1)取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。 (2)按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時(shí)不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None。 【陽(yáng)性判斷值或者參考區(qū)間】 1.試劑盒有效性判定: (1)陽(yáng)性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。 (2)陰性對(duì)照:Ct值>38或無(wú)Ct值,線形為直線或輕微斜線,無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。 2.標(biāo)本結(jié)果判定: (1)陽(yáng)性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。 (2)可疑:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,則判定為陽(yáng)性,否則為陰性。 (3)陰性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無(wú)Ct值。 【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
【檢驗(yàn)方法的局限性】
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 產(chǎn)品的低檢出限為102 Copies/mL,產(chǎn)品CV值≤5%。 【注意事項(xiàng)】
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