細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒說明書 |
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詳細(xì)介紹 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
人細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒說明書 本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定人血清,細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)的含量。 實(shí)驗(yàn)原理: 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)水平。用純化的人細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1),再與HRP標(biāo)記的細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)濃度。 試劑盒組成:
樣本處理及要求: 1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。 2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。 3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。 4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。 6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融. 7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟
注意事項(xiàng):
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。 計(jì)算: 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo), 在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋 倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋 倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。 試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。 2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11% 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6個月 |