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大鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA工作指南
點擊次數(shù):1683 更新時間:2010-09-05

          大鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA工作指南

本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本中環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的含量。

實驗原理:

   本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)水平。用純化的大鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入環(huán)磷酸腺苷(cAMP),再與HRP標記的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)濃度。

樣本處理及要求

 

1.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

2.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

3.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。

4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

注意事項:

a .試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

B . 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

C .各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

D .請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

E .封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

 

如有問題請:公司!

 

 

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