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人全血單個核細胞分離液說明書
點擊次數(shù):2108 更新時間:2016-01-07


本品只能用于科學研究,不能用于臨床檢測

 

 

本品于 GMP 標準下生產(chǎn)

 

 

 

 
人全血單個核細胞分離液說明書
 
【包裝規(guī)格】
 
200ml/
 
【實驗前準備】
 
A 適用儀器
 
zui大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
B 耗材
 

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號

產(chǎn)地

 

 

 

15ml 離心管散裝

339650

美國 NUNC

 

 

 

15ml 離心管架裝

339651

美國 NUNC

 

 

 

50ml 離心管散裝

339652

美國 NUNC

 

 

 

50ml 離心管架裝

339653

美國 NUNC

 

 

 

無菌膠頭滴管或塑料滴管

 

 

 

 

 

 
【檢驗方法】 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2的條件下進行。 首先根據(jù)樣本量大小,分以下幾種情況:
 
一、 使用 15ml 離心管時:
 
情況 A:血液樣本量小于 3ml 時,實驗方法如下:
 
1.     取一支 15ml 離心管,加入 3ml 分離液。
 
2.     用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,400-650g,離心 20-30min(注:根據(jù)血 液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件 需客戶自行摸索,以達到*分離效果)。
 
3.     離心后,此時離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個 核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 
4.     用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中,向所得離心管 中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細胞。
 
5.     250g,離心 10min
 
6.     棄上清。
 
7.     用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細胞。

 

 
 

 

 

 

本品只能用于科學研究,不能用于臨床檢測

 

本品于 GMP 標準下生產(chǎn)

 

 

 

 
8.     250g,離心 10min。
 
9.     重復(fù) 67、8,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。 情況 B:血液樣本量為 3-6ml 時,實驗方法如下:
 
1.     取一支 15ml 離心管,先加入與血液樣本等量的分離液。
 
2.     用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,400-650g,離心 20-30min(注:根據(jù)血 液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件 需客戶自行摸索,以達到*分離效果,但zui大離心力不超過 1000g)。
 
3.     離心后,此時離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個 核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 
4.     用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中,向所得離心管 中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細胞。
 
5.     250g,離心 10min
 
6.     棄上清。
 
7.     用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細胞。
 
8.     250g,離心 10min。
 
9.     重復(fù) 6、78,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。
 
二、 使用 50ml 離心管時:
 
情況 A:血液樣本量為 6-10ml 時,實驗方法如下:
 
1.     取一支 50ml 離心管,先加入與血液樣本等量的分離液。
 
2.     用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,500-950g,離心 20-30min(注:根據(jù)血 液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件 需客戶自行摸索,以達到*分離效果,但zui大離心力不超過 1200g)。
 
3.     離心后,此時離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個 核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 
4.     用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中,向所得離心管 中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細胞。
 
5.     250g,離心 10min。
 
6.     棄上清。
 
7.     用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細胞。

 

 
 

 

 

 

本品只能用于科學研究,不能用于臨床檢測

 

本品于 GMP 標準下生產(chǎn)

 

 

 

 
8.     250g,離心 10min。
 
9.     重復(fù) 678,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。 情況 B:血液樣本量為 10-20ml 時,實驗方法如下:
 
1.     取一支 50ml 離心管,先加入與血液樣本等量的分離液。
 
2.     用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上,650-110g,離心 20-30min(注:根據(jù)血 液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件 需客戶自行摸索,以達到*分離效果,但zui大離心力不超過 1200g)。
 
3.     離心后,此時離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個 核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 
4.     用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中,向所得離心管 中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細胞。
 
5.     250g,離心 10min。
 
6.     棄上清。
 
7.     用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細胞。
 
8.     250g,離心 10min
 
9.     重復(fù) 6、7、8,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。
 
【注意事項】
 
1.   全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2的條件下進行。為獲得*的實驗結(jié)果, 在取血 2h 內(nèi)進行實驗,血液存放時間越長,細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
 
2.   本實驗不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會變成毛面,影響細胞分離效果。
 
3.   吸取過多的單個核細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的
 
粒細胞數(shù)量增加。
 
4.   吸取過多的單個核細胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。
 
5.   如所實驗后細胞得率或活性過低,請以尋求幫助,具體 詳見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。
 
6.   當血液樣本粘度過高需稀釋時,*稀釋方法:將血液與樣本稀釋液(產(chǎn)品編號:
 
2010C11191:1 稀釋混勻備用。注:不當?shù)南♂尫椒〞档图毎寐始盎钚?。如血液?/span>
 


 
 

 

 

 

本品只能用于科學研究,不能用于臨床檢測

 

本品于 GMP 標準下生產(chǎn)

 
本經(jīng)過稀釋則分離過程中需適當降低離心力和離心時間。
 
【儲存條件及有效期】
 
18-25保存,有效期 2 年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟 封后置常溫保存。如 4保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。 【參考值(參考范圍)】
 
本實驗淋巴細胞提取率及純度均大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例,用戶可適當進行參考。
 

 

紅細胞

 

白細胞

 

血小板

 

 

 

 

 

 

 

 

4.0-10.0×109

 

 

4.0-5.5×1012

 

 

 

1.0-3.0×1011

含量(個/L

中性粒細胞

淋巴細胞

單核細胞

 

 

 

 

 

 

 

 

50%-70%

20%-40%

3%-8%

 

 

 

 

 

 

 

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

 

 

 

 

 
1.     所獲得淋巴細胞的培養(yǎng)技術(shù)。
 
2.     所獲得淋巴細胞的核酸提取技術(shù)。
 
3.     所獲得淋巴細胞的鑒定方法 A.流式細胞技術(shù) B.免疫組化技術(shù)
 
C.原位雜交技術(shù)
 
D.PCR 技術(shù) 注:上述技術(shù)方案詳情請登陸本搜索細胞
 
分離、純化、擴增及鑒定指導(dǎo)手冊,并在說明書項目欄下下載使用。 【可能存在的問題及解決方法】
 
1.  由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
 

出現(xiàn)情況

出現(xiàn)原因

建議解決方案

 

 

 

 

 

離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層

轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短

適當增減轉(zhuǎn)速

 

 

 

 

離心后目的細胞存在于分離液中

轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

 

 

 

 

 

 

 

離心后白環(huán)層彌散

細胞密度過大

調(diào)整細胞密度

 

 

 

 

離心后白環(huán)層太淺或看不見

細胞密度過小

 

 

 

 

 

 

 

 
2.  本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地
 
 

 

 

 

本品只能用于科學研究,不能用于臨床檢測

 

本品于 GMP 標準下生產(chǎn)

 
區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時,恒定離
 
心時間,對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。
 
3.  本分離液依照標準,全部使用藥用級原料,性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可
 
能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況,可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注:在對離心條件進行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達到*分離效 果,離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。

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