間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒
,成軟骨誘導(dǎo)液
貨號:YJ-MSCYD-003
價格: 1980.0
規(guī)格: 100ml 200ml
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品為團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化的間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化試劑盒,可增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞向成軟骨細(xì)胞分化的能力。
本產(chǎn)品僅用于科研用途,不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。
產(chǎn)品組成成分及保存
試劑名稱 | 體積(100mL規(guī)格/200mL規(guī)格) | 保存條件 |
誘導(dǎo)分化添加劑Ⅰ | 5mL / 10mL | -20℃,1 Year |
誘導(dǎo)分化添加劑Ⅱ | 1mL / 2mL | -20℃,1 Year |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10mL / 20mL | -20℃,1 Year |
細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 84mL / 168mL | 4℃,1 Year |
甲苯胺藍(lán)染色液 | 5mL / 10mL | RT(室溫),1 Year |
? 注意:1.為保證產(chǎn)品的有效性,請避免反復(fù)凍融。
2. 誘導(dǎo)分化添加劑Ⅱ須現(xiàn)用現(xiàn)配,加入培養(yǎng)基后,須在12小時內(nèi)用完,否則可能影響實(shí)驗(yàn)效果。
3. 配制好的誘導(dǎo)分化預(yù)混液(不含誘導(dǎo)分化添加劑Ⅱ)保存于2-8℃,有效期為2周。
產(chǎn)品使用說明(2D/3D培養(yǎng))
1. 成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基的配制
①室溫條件下融化添加劑及血清。(注意:若添加劑或血清中有沉淀物,屬正常現(xiàn)象,無須過濾,避免成分丟失。)
②配制誘導(dǎo)分化預(yù)混液:以下簡稱預(yù)混液。根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量,于無菌操作臺中配制。建議每次配制50mL,先加細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和胎牛血清,再加誘導(dǎo)分化添加劑。(配制比例見表一)
試劑成分 | 配制比例 | 50mL配制體系 |
誘導(dǎo)分化添加劑Ⅰ | 5% | 2.5mL |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10% | 5mL |
細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 85% | 42.5mL |
③配制誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基:根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量,按照1%的比例向預(yù)混液中添加誘導(dǎo)分化添加劑Ⅱ,如每1mL預(yù)混液添加10uL誘導(dǎo)分化添加劑Ⅱ。(注意:誘導(dǎo)分化添加劑Ⅱ須現(xiàn)用現(xiàn)加,配制完成的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基12h內(nèi)使用完,否則將失效。)
2. 2D成軟骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)步驟
①建議取第3~5代、純度達(dá)90%以上、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細(xì)胞,將其消化下來,離心收集,使用含10%FBS的培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度,均勻鋪于培養(yǎng)瓶/板中。將接種好的細(xì)胞置于37℃,5%CO2,飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(細(xì)胞接種詳情參考表二)
培養(yǎng)器皿 | 底面積 | 細(xì)胞量 | 培養(yǎng)液體積 |
24孔培養(yǎng)板 | 2cm/孔 | 2×105cell/孔 | 1mL/孔 |
12孔培養(yǎng)板 | 4.5cm/孔 | 4.5×105cell/孔 | 2mL/孔 |
6孔培養(yǎng)板 | 9.6cm/孔 | 9.6×105cell/孔 | 2mL/孔 |
T25培養(yǎng)瓶 | 25cm | 25×105cell | 5mL |
6cm培養(yǎng)皿 | 21cm | 21×105cell | 5mL |
10cm培養(yǎng)皿 | 55cm | 55×105cell | 10mL |
表二
②待細(xì)胞匯合度達(dá)80%~100%時,即可進(jìn)行誘導(dǎo)分化。
③小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清,沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基,置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(注意:完全培養(yǎng)基加入細(xì)胞前需提前置于37℃預(yù)熱。)
④每2day~3day換用新鮮的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基。換液時,若細(xì)胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色,是由于細(xì)胞量較大,培養(yǎng)基消耗較快導(dǎo)致的,請及時調(diào)整為每日換液。(注意:完全培養(yǎng)基加入前需提前置于37℃預(yù)熱。)
⑤細(xì)胞誘導(dǎo)3周后,即可進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色鑒定。
3. 2D成軟骨細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色分析
①細(xì)胞誘導(dǎo)分化結(jié)束后,小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清,1×PBS潤洗1~2次,室溫固定30 min。(細(xì)胞固定液為4%中性甲醛溶液等,體積參考表二)
②吸棄細(xì)胞固定液,1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入甲苯胺藍(lán)染色液,染液體積請參考表二,室溫染色30min。(注意:染色液底部可能會有沉淀,吸取時盡量不要觸及底部。若染色后有沉淀,1×PBS洗去即可。)
③吸出染色液,1×PBS潤洗,去掉浮色。顯微鏡下觀察細(xì)胞染色效果,背景呈淡藍(lán)色,成軟骨細(xì)胞呈紫紅色。(注意:染色液可重復(fù)使用,建議收集。)
4. 3D成軟骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)步驟
①建議取第3~5代、純度達(dá)90%以上、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細(xì)胞,將其消化下來,計數(shù)。調(diào)整細(xì)胞濃度,按照每管3~4×105cell將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15mL離心管中,20℃,250×g離心4min。
②棄上清,每管加入0.5mL預(yù)混液,重懸細(xì)胞沉淀。20℃,150×g離心5min。
③棄上清,每管加入0.5mL成軟骨誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀,20℃,150×g離心5min。
④將離心管樹立放置于37℃,5%CO2,飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),擰松離心管蓋以便于氣體交換。(注意:此步驟無需重懸細(xì)胞,且24h內(nèi)不可晃動離心管。)
⑤約24h~48h后,細(xì)胞出現(xiàn)聚團(tuán)現(xiàn)象,輕彈離心管底部使軟骨球脫離管底懸浮于培養(yǎng)液中。
⑥每2~3day換用新鮮的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基,持續(xù)誘導(dǎo)三周后,即可將培養(yǎng)液更換為固定液(4%中性甲醛),將軟骨球固定,后續(xù)進(jìn)行切片染色鑒定實(shí)驗(yàn)。
質(zhì)量控制
無菌檢測(細(xì)菌、真菌和支原體檢測)
pH測試
滲透壓檢測
內(nèi)毒素
相關(guān)產(chǎn)品
l YJ間充質(zhì)干細(xì)胞
l YJ原代間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)體系,貨號:PriMed-YJ-012-SF
l PBS緩沖液,貨號:YJ-0800
注意事項(xiàng)
僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì),請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部;這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,如有接觸,立即用自來水沖洗即可。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十余年,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。
實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):