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CCK-8試劑盒具體的操作方法有多種
點擊次數(shù):1063 更新時間:2022-07-24
  CCK-8試劑盒在的實際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計,具體的方法步驟可有多種。
  如雙抗體夾心法、間接法、競爭法、雙位點一步法、捕獲法測IgM抗體、應(yīng)用親和素和生物素的ELISA。CCK-8試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品的濃度。
  CCK-8試劑盒的詳細操作規(guī)程:
  1、使用前請先將試劑盒在室溫下平衡半小時。
  2、空白孔不加樣,只加顯色劑A,B和終止液用于調(diào)零。
  3、標準品孔:每孔加入稀釋好的標準品50μl,零孔加入標準品/樣品稀釋液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必須要做,并將其作為標曲的后一個點)。
  4、樣品孔:加入樣品50μl(推薦直接加樣,濃度高可以用樣品稀釋液稀釋2-5倍),然后加入生物素抗原工作液50μl。
  5、輕輕搖晃,蓋上封板膜,37℃培養(yǎng)箱中孵育30min。
  6、將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用。
  7、次洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  8、加入50μl親和素-HRP到標準品孔和樣品孔中,輕輕搖晃,蓋上封板膜,37℃培養(yǎng)箱中孵育30min。
  9、第二次洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  10、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
  11、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
  12、測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。

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