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CCK-8試劑盒操作步驟和洗滌方法
點擊次數(shù):1503 更新時間:2020-11-20
  CCK-8試劑盒實驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
  CCK-8試劑盒操作步驟:
  1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  3.待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
  4.隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.E2檢測CCK-8試劑盒每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
  CCK-8試劑盒洗滌的兩大方法
  一、浸泡式
  1.吸干或甩干孔內(nèi)反應液;
  2.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
  3.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;
  4.吸干孔內(nèi)液體。吸干應*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
  5.重復操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。
  二、流水沖洗式
  初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡便、快速。已有實驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。

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