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Easy-Lowry蛋白定量試劑盒說明書
點(diǎn)擊次數(shù):2505 更新時(shí)間:2020-09-23

 

 

Easy-Lowry蛋白定量試劑盒說明書

Easy-Lowry Protein Assay Kit

Easy-Lowry蛋白定量試劑盒

 

目錄號(hào):K2341

保存:BSA 標(biāo)準(zhǔn)品:2-8℃

其  它 組  分:室  溫

 

 組分說明

 

Cat. No.                    K2341

Kit Size                    1000 次/微孔,50 次/試管

試劑 A                        50 ml

試劑 B                        25 ml

BSA 標(biāo)準(zhǔn)品 (2 mg/ml)     2 ml

 

產(chǎn)品簡介

 

    Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是一種操作簡便快捷的 Lowry 法蛋白定量試劑盒,可用于多種不同緩沖系統(tǒng)以及各種不同蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)。Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是在 Improved-Lowry 蛋白定量試劑盒基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化改良的產(chǎn)品,其保留了Improved-Lowry 抵抗干擾能力較強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn),并進(jìn)一步簡化了操作步驟,減少了檢測(cè)時(shí)間,并且能得到與mproved-Lowry 蛋白定量接近的定量結(jié)果,其檢測(cè)范圍為 0-2000 μg/ml。

 

 注意事項(xiàng)

  1.  本產(chǎn)品可以采用分光光度計(jì)(試管檢測(cè)法)或者酶標(biāo)儀(微孔檢測(cè)法)測(cè)定蛋白濃度。

 2.  建議每次測(cè)定蛋白樣品時(shí),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,以獲得準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。

 3.  BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測(cè)樣品的稀釋液一致(可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水稀釋)。

 4.  如待測(cè)樣品中含較多的干擾物質(zhì)(具體見附表 1),可采用 Bradford 法蛋白定量試劑盒(K0013)或其他蛋白定量產(chǎn)品。  

 

 操作步驟

 

 1.  稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品:用與待測(cè)蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品。

 

 

管號(hào)        稀釋液用量(μl)BSA標(biāo)準(zhǔn)品用量(μl)   BSA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度(μg/μl)

                                                            

A                  0                 200                       2

B                 200                200                       1

C                 200          200(從B管中?。?              0.5

D                 200          200(從C管中取)              0.25

E                 200          200(從D管中?。?             0.125

F                200                 0                         0(空白)

 

 2.  稀釋試劑 B:將試劑 B 用去離子水稀釋 8 倍混勻待用。

 

 3.  定量檢測(cè):

 

 3a.  試管檢測(cè)法(蛋白濃度檢測(cè)范圍:0-2 μg/μl)

 

    1)按上表,將稀釋好的 A-F BSA 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品(原液或稀釋液)各 200 μl  分別加到作好標(biāo)記的試管中。

 

    2)向各試管中加 1 ml 試劑 A 迅速振蕩混勻,室溫準(zhǔn)確放置 10 分鐘。

 

    3)向各試管中加入 4 ml 稀釋過的試劑 B,迅速在渦旋儀上混勻,室溫靜置 30 分鐘。

 

    4)用分光光度計(jì)測(cè)定 750 nm 下的吸光度值。

 

    5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

 

 3b.  微孔檢測(cè)法(蛋白濃度檢測(cè)范圍:0-2 μg/μl)

 

    1)按上表,將稀釋好的 A-F BSA 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品(原液或稀釋液)各 5 μl 分別加到作好標(biāo)記的 96 孔板微孔中。

 

    2)向各微孔中加 50 μl 試劑 A,迅速用酶標(biāo)儀振蕩混勻,室溫準(zhǔn)確放置 10 分鐘。

 

    3)向每孔中加入 200 μl 稀釋過的試劑 B,迅速用酶標(biāo)儀振蕩混勻,室溫靜置 30 分鐘。

 

    4)用酶標(biāo)儀測(cè)定 750 nm 下的吸光值。

 

    5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的蛋白濃度。

 

注意:

 

  1)建議以去除背景值后的吸光值讀數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

 

  2)由于操作誤差導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品讀數(shù)嚴(yán)重偏離線性曲線的應(yīng)舍去。

 

  3)未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中計(jì)算得出,  實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。

 

  4)如果得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi),請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。  

 

 

                          附表 1.干擾物附表

 

    化合物               耐受濃度                化合物               耐受濃度

                          緩沖液                               去垢劑及變性劑

    磷酸鉀                0.03 M           去氧膽酸鈉               0.0625%

    甘氨酸               0.25 mM             CHAPS              1 mM

    HEPES              2.5  μM            辛葡糖                 干擾

     MES               25  μM              SDS               1.25%

    MOPS               25  μM          Triton X-100          0.25%

  Na +-檸檬酸                 2.5  μM          糖類

      

    PIPES              5  μM             葡萄糖               30 mM

    磷酸鈉               0.25  μM             蔗糖               10  μM

    螯合劑

      TES               1 mM

      Tris             250  μM             EDTA             125  μM

                           鹽類       EGTA               干擾

                                                   還原劑

    硫酸銨                28  μM

     NaCl              30  μM           β-巰基乙醇              1.75mM

     尿素                200  μM             DTT              50  μM

                                                    其他

                          極性化合物

     丙酮                 1.25%            丙烯酰胺             1.25 mg/ml

    DMSO                6.20%              DNA            190  μg/ml

     乙醇                12.50%              脂類                25mM

1,2-亞乙基二醇               0.25%           兩性電解質(zhì)                 干擾

     甘油                  25%             中性 TCA           12.5 mg/ml

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 

WB代做

HE染色

免疫熒光染色

蛋白相互作用分析

ELISA免費(fèi)代檢測(cè)

免疫組化

熒光定量PCR

番紅O固綠染色

流式細(xì)胞檢測(cè)

激光共聚焦

透射電鏡服務(wù)

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

免疫共沉淀(Co-IP)

DNA甲基化

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA 測(cè)序

半定量RT-PCR

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

原位雜交(FIsh)

石蠟/冰凍切片

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP

CCK8檢測(cè)

蛋白雙向(2-D)電泳

蛋白雙向2D-WB

ATP/ADP檢測(cè)

Taqman探針

細(xì)胞劃痕

基因組DNA提取

 

 

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