幼倉鼠腎細胞(BHK-21)
細胞介紹
BHK-21細胞系(Baby hamster kidney cell line)是從敘利亞幼鼠腎組織中分離培養(yǎng)獲得的成纖維型貼壁細胞系,其可連續(xù)傳代。BHK-21細胞系可以用于多種病毒的增殖和純化,如口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,F(xiàn)MDV)、腦心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)、呼腸孤病毒(Reovirus)、水皰性口炎病毒(Vesicularstomatitis virus,VSV)等。目前,BHK-21細胞系已被廣泛應(yīng)用于口蹄疫疫苗的生產(chǎn)。
細胞特性
1) 來源:倉鼠腎
2) 形態(tài):成纖維細胞樣,貼壁生長
3) 含量:>1x106
4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;(2)存活細胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
收到細胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。
細胞用途:僅供科研使用。
細胞接收后的處理:
1) 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,hao在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準(zhǔn)確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3) 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。
5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基)。
6)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第yi次傳代建議1:2傳代 。
細胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備MEM(推薦iCell-0012)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行。
細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項:
1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
實驗代做服務(wù):
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