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SDS-PAGE凝膠制備試劑盒操作步驟
SDS-PAGE Gel Kit
SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
目錄號(hào)：K0022
組分說(shuō)明及保存條件
Catalog no. |
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| K0022 | K0022A |
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Size | 40-60塊膠 | 200-300塊膠 | 保存條件 |
30%Acr-Bis(29:1) | 100 ml | 500 ml | 2-8ºC |
分離膠緩沖液 | 100 ml | 500 ml | 2-8ºC |
濃縮膠緩沖液 | 50 ml | 250 ml | 2-8ºC |
APS（過(guò)硫酸銨） | 0.5 g | 2.5 g | 2-8ºC |
TEMED | 1 ml | 5 ml | 2-8ºC，避光 |
本產(chǎn)品所提供的APS（過(guò)硫酸銨）為固體粉末，使用前加入雙蒸水溶解即配制10%APS溶液（0.5 g APS加5ml雙蒸水、2.5 g APS加25ml雙蒸水），將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。
本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本產(chǎn)品包括SDS-PAGE凝膠制備所需全套試劑，只需自備蒸餾水，即可制備高質(zhì)量
各種濃度的變性PAGE凝膠，方便、快捷。本試劑盒在分離膠緩沖液和濃縮膠緩沖液中
已加入10%SDS,使用時(shí)不用另外加入。
注意事項(xiàng)
1. 10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定，應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間，每
次取用后立即放回冰箱，以防失效；若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長(zhǎng)，應(yīng)考慮更換使用
-20度保存的10%APS。
2. PAGE凝膠的凝聚速度與溫度以及APS、TEMED的用量密切相關(guān)；在其它條件不變
的情況下，可通過(guò)改變APS及TEMED的用量，控制PAGE凝膠的聚合速度，凝膠聚
合過(guò)快不利于操作；附表中的 APS及TEMED量可供參考，應(yīng)根據(jù)實(shí)際操作情況做
適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。
3. 在凝膠配制過(guò)程中，尤其是液體混勻步驟，應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
4. 在分離膠上層加蒸餾水時(shí)要小心操作，加水時(shí)速度不能太快。
5. 丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，操作時(shí)請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。
6. 本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)或人體治療。
操作步驟
根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度，膠濃度請(qǐng)參考附表1。
I 灌制分離膠（各試劑使用量請(qǐng)參考附表3）
1．參照凝膠模具說(shuō)明書，裝配好凝膠模具。
注：加入上層篩板有助于加樣時(shí)保持填料與樣品均勻接觸，是否加入上層篩板可根據(jù)實(shí)際情況選擇。
2．將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、分離膠緩沖液和雙蒸水在小燒杯或試管中混合。
3．加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
4．在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對(duì)于 mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端
1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層，
使凝膠表面保持平整。
5．靜置30-60分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，表面凝膠已聚合。
II灌制濃縮膠（各試劑使用量請(qǐng)參考附表2）
1．去除覆蓋在分離膠上的水層。
2．將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、濃縮膠緩沖液和雙蒸水在一個(gè)小燒杯或試管中混
合。
3．加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
4．將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。
5．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
6．靜置10~20分鐘，等待濃縮膠聚合。
7．待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。
8．進(jìn)行常規(guī)電泳操作。
附表
附表1. SDS-PAGE分離膠的濃度與建議分離范圍
SDS-PAGE分離膠濃度 | 建議分離范圍 |
6%膠 | 50-150 kD |
8%膠 | 30-90 kD |
10%膠 | 20-80 kD |
12%膠 | 12-60 kD |
15%膠 | 10-40 kD |
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附表2.配制5%SDS-PAGE濃縮膠
凝膠體積 |
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| 所需各組分體積（單位：ml） | 10%APS | TEMED |
| 雙蒸水 | 30%Acr-Bis(29:1) | 濃縮膠緩沖液（4×） |
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2 ml | 1.14 | 0.34 | 0.5 | 0.02 | 0.002 |
4 ml | 2.28 | 0.68 | 1 | 0.04 | 0.004 |
6 ml | 3.42 | 1.02 | 1.5 | 0.06 | 0.006 |
8 ml | 4.56 | 1.36 | 2.0 | 0.08 | 0.008 |
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
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