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SDS-PAGE凝膠制備試劑盒操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):4782 更新時(shí)間:2020-05-30

SDS-PAGE凝膠制備試劑盒操作步驟

 

SDS-PAGE Gel Kit

SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

 

目錄號(hào):K0022

 

 

組分說(shuō)明及保存條件

 

Catalog no.

 

 

 

 

K0022

K0022A

 

Size

40-60塊膠

200-300塊膠

保存條件

30%Acr-Bis(29:1)

100 ml

500 ml

2-8ºC

分離膠緩沖液

100 ml

500 ml

2-8ºC

濃縮膠緩沖液

50 ml

250 ml

2-8ºC

APS(過(guò)硫酸銨)

0.5 g

2.5 g

2-8ºC

TEMED

1 ml

5 ml

2-8ºC,避光

 

 

本產(chǎn)品所提供的APS(過(guò)硫酸銨)為固體粉末,使用前加入雙蒸水溶解即配制10%APS溶液(0.5 g APS加5ml雙蒸水、2.5  g APS加25ml雙蒸水),將溶液分裝后置于-20℃保存,通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。

 

 

            本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途  

 

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

  本產(chǎn)品包括SDS-PAGE凝膠制備所需全套試劑,只需自備蒸餾水,即可制備高質(zhì)量

各種濃度的變性PAGE凝膠,方便、快捷。本試劑盒在分離膠緩沖液和濃縮膠緩沖液中

已加入10%SDS,使用時(shí)不用另外加入。

 

注意事項(xiàng)

 

1.  10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定,應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間,每

   次取用后立即放回冰箱,以防失效;若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長(zhǎng),應(yīng)考慮更換使用

   -20度保存的10%APS。

2.  PAGE凝膠的凝聚速度與溫度以及APS、TEMED的用量密切相關(guān);在其它條件不變

   的情況下,可通過(guò)改變APS及TEMED的用量,控制PAGE凝膠的聚合速度,凝膠聚

   合過(guò)快不利于操作;附表中的 APS及TEMED量可供參考,應(yīng)根據(jù)實(shí)際操作情況做

   適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

3.  在凝膠配制過(guò)程中,尤其是液體混勻步驟,應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。

4.  在分離膠上層加蒸餾水時(shí)要小心操作,加水時(shí)速度不能太快。

5.  丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性,操作時(shí)請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。

6.  本產(chǎn)品僅用于科研,不能用于人體實(shí)驗(yàn)或人體治療。

 

操作步驟

 

根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度,膠濃度請(qǐng)參考附表1。

 I 灌制分離膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表3)

1.參照凝膠模具說(shuō)明書,裝配好凝膠模具。

 

注:加入上層篩板有助于加樣時(shí)保持填料與樣品均勻接觸,是否加入上層篩板可根據(jù)實(shí)際情況選擇。

2.將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、分離膠緩沖液和雙蒸水在小燒杯或試管中混合。

3.加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。

4.在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對(duì)于 mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端

   1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層,

   使凝膠表面保持平整。

 

5.靜置30-60分鐘,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后,表面凝膠已聚合。

 

 II灌制濃縮膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表2)

1.去除覆蓋在分離膠上的水層。

2.將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、濃縮膠緩沖液和雙蒸水在一個(gè)小燒杯或試管中混

   合。

3.加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。

4.將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。

5.將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。

6.靜置10~20分鐘,等待濃縮膠聚合。

7.待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。

8.進(jìn)行常規(guī)電泳操作。

 

附表

 

  附表1. SDS-PAGE分離膠的濃度與建議分離范圍         

SDS-PAGE分離膠濃度

建議分離范圍

6%膠

50-150 kD

8%膠

30-90 kD

10%膠

20-80 kD

12%膠

12-60 kD

15%膠

10-40 kD

 

 

      

附表2.配制5%SDS-PAGE濃縮膠

凝膠體積

 

 

所需各組分體積(單位:ml)

10%APS

TEMED

 

雙蒸水

30%Acr-Bis(29:1)

濃縮膠緩沖液(4×)

 

 

2 ml

1.14

0.34

0.5

0.02

0.002

4 ml

2.28

0.68

1

0.04

0.004

6 ml

3.42

1.02

1.5

0.06

0.006

8 ml

4.56

1.36

2.0

0.08

0.008

                        

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

 

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

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細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

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