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過氧化物酶(Peroxidase,POD)試劑盒說明書
點擊次數(shù):1614 更新時間:2020-03-16

過氧化物酶(Peroxidase,POD)試劑盒說明書

可見分光光度法

試劑的組成:

提取液:液體60mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體60mL×1瓶,4保存;

試劑二:液體×2瓶,4保存;用時每瓶加入5mL試劑一;用不完的試劑4℃保存一周;

試劑三:液體10 mL×1瓶,4保存。

測定意義:

PODEC 1.11.1.7廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟:

  • 粗酶液提?。?/span>
  • 細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

  • 血清(漿)樣品:直接檢測。
  • 測定步驟和加樣表:

試劑名稱(µL

測定孔

樣本

15

蒸餾水

270

試劑一

520

試劑二

130

試劑三

135

測定前將試劑一、二和三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min。在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑,立即混勻并計時,記錄470nm30s時的吸光值A11min30s后的吸光值A2。計算ΔAA2-A1。

 

注意:

  • 若一次性測定樣本較多,可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液,在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min以上,測定時加入15µL樣本和1055µL混合液測定。
  • 如果ΔA小于0.005,可將反應時間延長到5min。如果ΔA大于0.5,可將樣本用提取液稀釋后測定,計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。

三、POD活性計算:

  • 血清(漿)POD活性

單位定義:每mL血清(漿)在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

計算公式:PODU/mL=ΔA×V反總÷V÷0.01÷T =7133×ΔA

  • 組織、細菌或細胞POD活性
  • 按樣本蛋白濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

PODU/mg prot)=ΔA×V反總÷V×Cpr÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

  • 按樣本鮮重計算

單位定義:每g組織在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

PODU/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

  • 按細菌或細胞密度計算

單位定義:每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

PODU/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V÷V樣總)÷0.01÷T =14.27×ΔA

V反總:反應體系總體積,1.07mL; V樣:加入樣本體積,0.015mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量;500:細菌或細胞總數(shù),500萬。

 

實驗代做服務:

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

 

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務

流式細胞檢測

細胞增殖

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA 測序

動物實驗

Taqman探針

ATP/ADP檢測

 

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗

 

免疫共沉淀

真核表達載體構建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標定量(Label-free)實驗

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